L’objectif de cet enseignement pratique est d’initier l’étudiant aux techniques de clonage de gènes, de production inductible et de purification de protéines recombinantes associées à une/des étiquette(s). Il constitue pour l’étudiant une base indispensable permettant d’aborder le développement de nouveaux biomédicaments.

• Amplification d’un gène par PCR
• Purification d’ADN sur mini-colonne de silice
• Caractérisation quantitative et qualitative d’un ADN par spectrophotométrie d’absorption NanoDrop
• Clonage par recombinaison avec la technologie Gateway
• Préparation et transformation de bactéries compétentes
• Criblage de colonies bactériennes par PCR
• Expression de protéines recombinantes dans un système bactérien inductible
• Purification des protéines recombinantes avec étiquette histidine sur billes de Ni2+
• Ateliers de travail sur la PCR, le clonage de gènes par la technologie Gateway et sur l’expression et la purification de protéines recombinantes

Enseignants participants :
E. Boutant
M. Lehmann

A la fin de l'enseignement l’étudiant sera capable :

• d’expliquer les principes des expériences qu’il réalisera
• de suivre et respecter les consignes des protocoles qui lui seront fournis
• d’analyser ses résultats (indiquer/identifier son résultat expérimental, l’illustrer avec des graphiques, le comparer aux données théoriques et commenter les données obtenues pour ses échantillons ainsi que pour les échantillons contrôle)
• de tenir un cahier de laboratoire conforme
• de proposer des approches similaires de clonage de gènes et d’expression/purification de protéines recombinantes fusionnées à une/des étiquette(s)

Un polycopié décrivant le principe et le mode opératoire des expériences qui seront effectuées lors de ces travaux pratiques ainsi que le déroulement des séances, sera distribué aux étudiants quelques jours avant le début des travaux pratiques.