Cette UE propose un panorama complet et actualisé des approches biochimiques et biophysiques permettant l’étude des complexes macromoléculaires. L’un des objectifs principaux est de fournir aux étudiants un inventaire des méthodes en biologie moléculaire et cellulaire, biochimie et biophysique adaptés à l’étude des complexes macromoléculaires stables ou transitoires. Identification, reconstitution et caractérisation biochimique :

• Approches in vivo pour l’identification et la purification des complexes (TAP tag/MS foot-printing, ingénierie du génome).

• stratégies et techniques adaptées à production et purification: production de complexes recombinants (reconstitution in vitro, coexpression en système d’expression procaryote et eucaryote, stratégies de purification, caractérisation biochimique).

• Bases théoriques des approches biophysiques mises en œuvre (spectrométrie de masse, fluorescence, thermochimie,…).

• Aspects énergétiques et cinétiques des mécanismes d’assemblages (microcalorimétrie, EMSA, biosenseurs, fluorescence), traitement des équilibres de fixation/allostérie.

• Approches hydrodynamiques permettant d’évaluer facteurs de diffusion et/ou facteurs de forme dont les techniques d'ultracentrifugation analytique et de mesures de corrélation ou d'anisotropie de fluorescence.

• Techniques permettant la mesure de la taille et forme des complexes macromoléculaires incluant la spectrométrie de masse adaptée à l’étude des complexes non covalents et les approches basées sur les techniques de diffusion de la lumière (diffusion statique de la lumière, diffusion des rayons X ou des neutrons).
• Travaux dirigés portant principalement sur l’interprétation de données expérimentales (spectres de masse, fonction d’auto-corrélation, courbes de diffusion, données d’ultracentrifugation analytique,..)

 

• Savoir choisir une stratégie appropriée pour l’étude d’un complexe.
• Appréhender les contraintes liées à l'utilisation des techniques choisies.
• Apprendre à utiliser les ressources documentaires appropriées (bases de données dédiées à l’étude de complexes)
• Apprendre à interpréter les résultats d’expériences extraites de publications.